(Flödescytometri, FCM) är en cellanalysator som mäter fluorescensintensiteten för färgade cellmarkörer. Det är en högteknologisk teknik utvecklad baserad på analys och sortering av enstaka celler. Det kan snabbt mäta och klassificera storleken, den inre strukturen, DNA, RNA, proteiner, antigener och andra fysiska eller kemiska egenskaper hos celler och kan baseras på insamlingen av dessa klassificeringar.
Flödescytometer består huvudsakligen av följande fem delar:
1 flödeskammare och fluidiksystem
2 laserljuskälla och strålformningssystem
3 Optiskt system
4 Elektronik, lagring, visning och analyssystem
5 Cell sorteringssystem
Bland dem är laserexcitation i laserljuskällan och strålformningssystemet den huvudsakliga mätningen av fluorescenssignaler i flödescytometri. Intensiteten hos excitationsljuset och exponeringstiden är relaterad till intensiteten hos fluorescenssignalen. Laser är en sammanhängande ljuskälla som kan ge envåglängd, högintensiv och högstabilitet belysning. Det är den ideala excitationsljuskällan för att uppfylla dessa krav.
Det finns två cylindriska linser mellan laserkällan och flödeskammaren. Dessa linser fokuserar en laserstråle med ett cirkulärt tvärsnitt som släpps ut från laserkällan till en elliptisk stråle med ett mindre tvärsnitt (22 μm × 66 μm). Laserenergin i denna elliptiska stråle distribueras enligt en normalfördelning, vilket säkerställer konsekvent belysningsintensitet för celler som passerar genom laserdetekteringsområdet. Å andra sidan består det optiska systemet av flera uppsättningar av linser, nålhål och filter, som grovt kan delas upp i två grupper: uppströms och nedströms flödeskammaren.
Det optiska systemet framför flödeskammaren består av en lins och nålhål. Linsens och pinhålets huvudfunktion (vanligtvis två linser och ett nålhål) är att fokusera laserstrålen med ett cirkulärt tvärsnitt som släpps ut av laserkällan till en elliptisk stråle med ett mindre tvärsnitt. Detta distribuerar laserenergin enligt en normalfördelning, vilket säkerställer en konsekvent belysningsintensitet för celler över laserdetekteringsområdet och minimerar störningar från bortfallen ljus.
Det finns tre huvudtyper av filter:
1: Long Pass Filter (LPF) - tillåter endast ljus med våglängder högre än ett specifikt värde att passera igenom.
2: Kortpassfilter (SPF) - tillåter endast ljus med våglängder under ett specifikt värde att passera igenom.
3: Bandpass Filter (BPF) - tillåter endast ljus i ett specifikt våglängdsområde att passera.
Olika kombinationer av filter kan rikta fluorescenssignaler vid olika våglängder till enskilda fotomultiplikatorrör (PMT). Till exempel är filter för detektering av grön fluorescens (FITC) framför PMT LPF550 och BPF525. Filtren som används för att detektera orange-röd fluorescens (PE) framför PMT är LPF600 och BPF575. Filtren för detektering av röd fluorescens (Cy5) framför PMT är LPF650 och BPF675.
Flödescytometri används huvudsakligen för cellsortering. Med främjandet av datateknik, utvecklingen av immunologi och uppfinningen av monoklonal antikroppsteknologi, blir dess tillämpningar inom biologi, medicin, apotek och andra områden alltmer utbredda. Dessa tillämpningar inkluderar celldynamikanalys, cellapoptos, celltypning, tumördiagnos, läkemedelseffektivitetsanalys etc.
Posttid: september-21-2023
