(Flödescytometri, FCM) är en cellanalysator som mäter fluorescensintensiteten hos färgade cellmarkörer. Det är en högteknologisk teknologi utvecklad baserad på analys och sortering av enstaka celler. Det kan snabbt mäta och klassificera storlek, inre struktur, DNA, RNA, proteiner, antigener och andra fysiska eller kemiska egenskaper hos celler, och kan baseras på insamlingen av dessa klassificeringar.
Flödescytometer består huvudsakligen av följande fem delar:
1 Flödeskammare och fluidiksystem
2 Laserljuskälla och strålformningssystem
3 Optiskt system
4 Elektronik, lagring, display och analyssystem
5 Cellsorteringssystem
Bland dem är laserexcitation i laserljuskällan och strålbildande systemet huvudmätningen av fluorescenssignaler i flödescytometri. Intensiteten hos excitationsljuset och exponeringstiden är relaterade till intensiteten hos fluorescenssignalen. Laser är en koherent ljuskälla som kan ge enkelvåglängd, hög intensitet och hög stabilitetsbelysning. Det är den idealiska excitationsljuskällan för att uppfylla dessa krav.
Det finns två cylindriska linser mellan laserkällan och flödeskammaren. Dessa linser fokuserar en laserstråle med ett cirkulärt tvärsnitt som sänds ut från laserkällan till en elliptisk stråle med ett mindre tvärsnitt (22 μm × 66 μm). Laserenergin inom denna elliptiska stråle fördelas enligt en normalfördelning, vilket säkerställer konsekvent belysningsintensitet för celler som passerar genom laserdetekteringsområdet. Å andra sidan består det optiska systemet av flera uppsättningar av linser, nålhål och filter, som grovt sett kan delas in i två grupper: uppströms och nedströms om flödeskammaren.
Det optiska systemet framför flödeskammaren består av en lins och nålhål. Huvudfunktionen för linsen och nålhålet (vanligtvis två linser och ett nålhål) är att fokusera laserstrålen med ett cirkulärt tvärsnitt som emitteras av laserkällan till en elliptisk stråle med ett mindre tvärsnitt. Detta fördelar laserenergin enligt en normalfördelning, vilket säkerställer konsekvent belysningsintensitet för celler över laserdetekteringsområdet och minimerar störningar från ströljus.
Det finns tre huvudtyper av filter:
1: Långpassfilter (LPF) - tillåter endast ljus med våglängder högre än ett specifikt värde att passera igenom.
2: Kortpassfilter (SPF) - tillåter endast ljus med våglängder under ett specifikt värde att passera igenom.
3: Bandpassfilter (BPF) - tillåter endast ljus i ett specifikt våglängdsområde att passera igenom.
Olika kombinationer av filter kan rikta fluorescenssignaler vid olika våglängder till individuella fotomultiplikatorrör (PMT). Till exempel är filter för att detektera grön fluorescens (FITC) framför PMT LPF550 och BPF525. Filtren som används för att detektera orange-röd fluorescens (PE) framför PMT är LPF600 och BPF575. Filtren för att detektera röd fluorescens (CY5) framför PMT är LPF650 och BPF675.
Flödescytometri används främst för cellsortering. Med framstegen inom datorteknik, utvecklingen av immunologi och uppfinningen av monoklonal antikroppsteknologi, blir dess tillämpningar inom biologi, medicin, farmaci och andra områden allt mer utbredda. Dessa applikationer inkluderar celldynamikanalys, cellapoptos, celltypning, tumördiagnos, läkemedelseffektivitetsanalys, etc.
Posttid: 21 september 2023
